摘要：大肠杆菌是人和动物肠道中共生菌群的组成部分，部分致病性大肠杆菌能引起多种传染病。因此，对食品中大肠杆菌进行调查和检验具有重要意义[1]。

本实验为了调查本地区（大连）生鲜食品的大肠杆菌污染情况，以猪肉为对象，在大连市开发区金马农贸市场，麦凯乐地下超市，乐购超级市场，新玛特超级市场等主要生鲜销售市场等共采集了60个样品，利用MAC培养基划线分离菌株，以大肠埃希菌ATCC25922为质控菌株，增菌后进行PCR实验来鉴定是否存在阳性菌。根据电泳实验结果得知，60份样品中检测出43株阳性菌株，分离率为72%。之后对大肠杆菌进行药敏实验，对14种药品的耐药性进行研究。试验结果表明，43株大肠杆菌阳性菌都具有不同程度的耐药性，且多数表现为多重耐药性，其中，四环素类抗生素耐药率最高（88.37%），其次为硫氰酸红霉素（83.72%）阿莫西林（81.40%）土霉素（76.74%）硫酸新霉素（74.41%）盐酸环丙沙星（72.40%）氯霉素（65.12%）硫酸庆大霉素（62.79%）诺氟沙星（58.14%）恩诺沙星（58.14%）氨苄西林（53.49%）氟苯尼考（34.88%）头孢曲松（13.95%）头孢噻肟（6.98%）由此可见，大连市猪肉中的大肠杆菌对各类抗生素表现出了耐药性，这种高耐药性也可能通过食物链传递给人，因此应该引起足够的重视。

关键词：猪肉；大肠杆菌；PCR鉴定；耐药性

目录

摘要

Abstract

1 绪  论-1

1.1 大肠杆菌概述-1

1.1.1 大肠杆菌简介-1

1.1.2 大肠杆菌生物学特性-1

1.2 大肠杆菌检测方法-1

1.2.1 生物传感器法-2

1.2.2 免疫学方法-2

1.2.3 PCR方法-2

1.3 细菌耐药性-3

1.3.1 细菌耐药性的产生与现状-3

1.3.2 药敏性实验方法-3

1.4 研究意义-4

1.5 研究内容-4

2 实验材料、试剂与仪器-5

2.1 实验材料-5

2.1.1 样品来源-5

2.1.2 质控菌-5

2.2 实验试剂-5

2.2.1 主要试剂-5

2.2.2 PCR体系-5

2.2.3 药敏纸片-6

2.3 实验仪器-6

3 实验方法-7

3.1 大肠杆菌的分离-7

3.1.1 样品采集-7

3.1.2 增菌-7

3.1.3 画平板-8

3.1.4 纯培养-8

3.1.5 保菌-8

3.2 大肠杆菌的鉴定-9

3.2.1 PCR模板制备-9

3.2.2 PCR反应体系-9

3.2.3 PCR反应条件-10

3.2.4 电泳-10

3.3 药敏性试验-11

3.3.1 药敏性原理-11

3.3.2 操作步骤-11

3.3.3 观察结果-12

4 实验结果分析-13

4.1 实验结果-13

4.1.1 大肠杆菌的分离-13

4.1.2 大肠杆菌的鉴定-13

4.1.3 药敏性试验-14

结  论-18

参考文献-19

致     谢-21

附    录-22