摘要：线粒体基因组有高度的种内保守性，其中的12S rRNA更具有抗腐蚀性和耐高温等特点，在国内外多用于鲜肉、肉制品以及饲料的物种成分鉴别研究。本研究选用牛肉、猪肉、鸡肉和鸭肉作为材料，提取肉类样品的DNA后设计梯度进行掺杂检验，结合利用PCR扩增和DNA测序技术鉴别牛肉中掺杂的其他肉类。结果表明，选用的一对通用引物能够有效地扩增12S rRNA片段，牛、猪、鸡、鸭的片段大小依次为440 bp、440 bp、438 bp和438 bp；纯肉样本PCR扩增产物的DNA测序峰图均为单峰，掺杂样本PCR扩增产物的DNA测序峰图均为多峰，表明建立的检测方法对于牛肉中掺杂猪肉、鸡肉和鸭肉的检出具有特异性。因此，结合运用PCR扩增和DNA测序技术是一种有效的检验方法，能够快速有效地检测出牛肉中掺杂的猪肉、鸡肉和鸭肉。

关键词：牛肉；PCR扩增；DNA测序；掺假

目录

摘要

Abstract

引  言-1

1材料与方法-2

1.1 实验材料与仪器-2

1.1.1 材料-2

1.1.2 仪器-3

1.2方法-3

1.2.1 DNA的制备-3

1.2.1.1 组织样品处理-3

1.2.1.2 细胞裂解-4

1.2.1.3 苯酚/氯仿法抽提-4

1.2.1.4 乙醇沉淀-4

1.2.1.5 DNA的溶解于保存-4

1.2.2 凝胶电泳检测-4

1.2.2.1 制备琼脂糖凝胶-4

1.2.2.2 电泳样品的处理和上样-4

1.2.2.3 拍照与观察-4

1.2.3 引物设计、PCR扩增与检测-5

1.2.4 DAN样品梯度掺杂-5

1.2.5 掺杂样品的检测-5

1.2.6 PCR-SSCP分析-5

1.2.6.1 聚丙烯酰胺凝胶的制备与电泳-5

1.2.6.2 染色-7

1.2.7 测序分析-7

2 结果与分析-7

2.1 基因片段的PCR扩增结果-7

2.2 各掺杂梯度肉样的PCR-SSCP结果分析-8

2.3 各样品PCR产物测序结果及分析-9

3 讨论-12

参考文献-14

附    录-16