摘要：食品安全问题成为越来越多人关注的话题，肉质掺假更是经常出现，建立一种快速、特异、灵敏度高的动物源性成分检测方法变得很有必要。本研究以线粒体12S rRNA 基因序列为目标，设计特异性引物，以羊肉、猪肉、鸡肉、鸭肉为研究对象，提取肌肉组织DNA，进行PCR扩增，对扩增产物进行凝胶电泳检测和DNA测序分析。结果表明，羊、猪、鸡、鸭的12S rRNA基因片段大小依次为440 bp、440 bp、438 bp和438 bp；羊肉、猪肉、鸡肉和鸭肉的12S rRNA基因片段测序均为单峰图，羊肉与猪肉混合样本、羊肉与鸡肉混合样本和羊肉与鸭肉混合样本的12S rRNA基因片段测序均为重叠峰图，测序出现重叠峰图说明检测到掺杂的肉样。因此，本研究建立的实验方法能够有效地检测羊肉中的掺假。

关键词︰羊肉；PCR-SSCP；12S rRNA基因；掺假

目录

摘要

Abstract

引言-1

1 材料与方法-2

1.1 实验材料-2

1.1.1 DNA提取试剂-2

1.1.2 琼脂糖凝胶电泳试剂-2

1.1.3 PCR-SSCP分析试剂-2

1.2实验仪器-3

1.3 DNA提取-3

1.3.1 组织样品的处理-3

1.3.2 细胞裂解-3

1.3.3 酚/氯仿法抽提-4

1.3.4 乙醇沉淀-4

1.3.5 DNA的溶解与保存-4

1.4 PCR引物扩增及检测-4

1.5 PCR-SSCP分析-5

1.5.1 电泳装置的准备-5

1.5.2 制胶、灌胶、装胶-6

1.5.3 电泳-6

1.5.4 冲洗-6

1.5.5 染色和显色-6

1.6 DNA测序及数据分析-6

2 结果与分析-7

2.1 12S rRNA基因片段的PCR扩增与检测结果-7

2.2 PCR-SSCP分析及测序结果分析-7

3 讨论-11

4 参考文献-14

5 附录-16