摘    要

   近年来，全球气候变暖、极端气候肆虐，不仅严重影响着生态环境，同时也强烈制约了农林业生产及经济社会的可持续发展，已经引起了全世界的高度关注。温度是影响植物的整个生长发育的重要因子之一，它影响着植物代谢和生理的多个生命进程。本课题以前期定位到的温度感应相关基因TSA1为基础，首先通过克隆其启动子并构建启动子驱动GUS基因的表达载体，并用农杆菌侵染方法构建GUS表达的拟南芥转基因植株，为后续的基因表达研究提供材料。其次，通过克隆其CDS序列并构建CDS融合GFP的表达载体，并通过烟草叶片瞬时转化实验来初步说明温度感应相关基因TSA1在亚细胞的定位。

目录

摘    要 3

Abstract 3

1.引言 5

1.1报告基因的应用 7

1.2 Gateway重组技术 7

2.GUS重组载体的构建与农杆菌转化 6

2.1实验材料与方法 6

2.1.1 实验材料与试剂 6

2.1.2 实验方法 7

2.2 实验结果与分析 12

2.2.1启动子PCR扩增和酶切 13

2.2.2 T4连接菌液PCR 13

2.2.3 质粒酶切 14

2.2.4  LR菌液PCR 14

2.3 结果分析讨论 15

3.GFP重组载体的构建与农杆菌转化 15

3.1 实验材料与方法 15

3.1.1 实验材料 15

3.1.2 实验方法 16

3.2 实验结果与分析 19

3.2.1 菌液PCR 19

3.2.2 农杆菌侵染瞬时转化烟草 21

3.3 结果分析讨论 21

4. 讨论与展望 22

参考文献 23

致谢 25