摘要:随着第三产业的迅速发展，我国的餐饮业规模日益扩大，餐饮废水中排出的废油脂日益增多，不仅堵塞管网、严重污染城市环境，甚至滋生出了废油脂的非法回收提炼，有毒“地沟油”回流市场用于食品加工等现象。这种被称作“地沟油”的三无产品，其主要成分仍然是甘油三脂，却又比真正的食用油多了许多致病、致癌的毒性物质。因此寻求一种成本低、效率高、对人和环境影响小的治理方法迫在眉睫。

在各种治理方法中，生物修复技术因为其治理成本低，降解效率高，并且不会引入二次污染等优点被认为是最具潜力和最有应用前景的油脂类污染修复手段。本课题致力于油污染环境的治理，以得到可高效降解油脂的菌株为目的，在污染环境中筛选目标微生物群，得到菌株后，对其进行鉴定及性能研究。

本课题的主要研究内容如下：

1以食用油作为微生物生长的唯一碳源，从自然界被食用油脂类污染过的土壤中经过富集、分离、驯化，筛选出5株具有食用油降解能力的菌株。选取其中生长速率较快，食用油生物降解率较高的一株菌A继续研究。

2通过形态观察、生理生化试验对菌株A进行了初步鉴定，然后对其进行16s rDNA序列分析，将其鉴定并命名为短小芽孢杆菌A（Bacillus pumilius A）。

3通过单因素试验考察了培养时间，初始食用油浓度，接种量及不同的培养条件下，菌株A对食用油的降解率的影响，确定了有较高食用油降解率的最适初始食用油含量为14 μL/mL、接种量为8%、温度为27℃、pH 为7.5、摇瓶转速180 r/min、培养时间为5d。根据单因素试验结果，选取对食用油降解率影响较大的因素：初始食用油浓度、温度、pH值、摇瓶转速进行正交试验，得到最优的条件为：初始食用油含量为14 μL/mL、温度27℃、pH8.0、摇瓶转速180 r/min，在此条件下，食用油降解率为68.12%。

关键词：食用油；筛选鉴定；正交实验；降解率；短小芽孢杆菌A

目录

摘要

ABSTRACT

 第一章 绪论-1

1.1 地沟油的危害-1

1.1.1地沟油对土壤的污染-1

1.1.2地沟油对人体的危害-1

1.1.3地沟油油类污染的治理-2

  1.1.4生物修复-2

 1.1.4.1 微生物处理油脂的机理-2

 1.1.4.2影响生物修复的因素-3

1.2课题研究意义-4

1.3研究内容-5

第二章 材料与方法..7.

2.1实验材料与培养基-7

2.1.1 实验材料与试剂-7

2.1.2 分子生物学实验相关材料-7

2.1.3实验所用主要仪器-7

2.1.4 培养基-8

2.2培养方法-8

2.2.1 斜面培养-8

2.2.2 种子培养-8

2.2.3 摇瓶培养-8

2.3 菌种的筛选和鉴定-9

2.3.1 食用油降解菌的富集与驯化-9

2.3.2 菌种的筛选-9

2.3.3 菌种的生理生化实验-9

2.3.4 菌种的分子生物学鉴定-10

2.3.5 16S rDNA的测序-11

2.4 食用油降解率的测定-11

2.4.1残余食用油的萃取-11

2.4.2 残余食用油的测定-11

2.4.3食用油降解率的计算方法-11

2.5 食用油降解条件的优化-11

2.5.1 初始食用油浓度对降解率的影响-12

2.5.2 培养时间对降解率的影响-12

2.5.3 培养温度对降解率的影响-12

2.5.4 接种量对降解率的影响-12

2.5.5 初始pH对降解率的影响-12

2.5.6 摇瓶转速对降解率的影响-12

2.5.7  正交实验设计-12

第三章  结果与讨论-13

3.1 菌种筛选-13

3.2 食用油降解菌株A鉴定-13

3.2.1菌种形态观察和生理生化试验-13

3.2.2分子鉴定-14

3.3摇瓶中种子的生长曲线-15

3.4 食用油的降解条件优化-16

3.4.1紫外分光光度计测定食用油浓度的标准曲线-16

3.4.2 初始食用油浓度对食用油降解率的影响-16

3.4.3 培养时间对食用油降解率的影响-17

3.4.4 培养温度对食用油降解率的影响-17

3.4.5 接种量对食用油降解率的影响-18

3.4.6 初始pH对食用油降解率的影响-18

3.4.7 摇瓶转速对食用油降解率的影响-19

3.4.8 各影响因素的正交实验-20

第四章  主要结论与展望-23

4.1主要结论-23

4.2展望-23

参考文献-25

致  谢-27