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摘 要
乙烯响应因子（ERF）是通过DRE和GCC—box顺式作用元件影响植物逆境胁迫（干旱、盐胁迫）响应的转录因子（TF）。由本文分别对我国大豆需求、盐碱地现状、盐胁迫影响机制、ERF转录因子作用机制进行了简单的讲解。实验前期，老师们通过蛋白质组学分析发现PTF19是与大豆耐盐响应相关的ERF转录因子，但是其亚细胞定位及其作用机制信息并不是很了解。本研究中，我们选用中黄57号大豆为原料，提取RNA构建cDNA文库，选用连接载体B-zero进行连T载，用限制性内切酶Kpn I和Sac I将GmPTF19基因导入表达载体PDL28-35-RFP和PDL28-35-DNA-UbqDsRed，最后将结果正确的T4连接转到发根农杆菌K599中，酶切结果无误后-80 ℃冰箱保存。本次实验就是构建含有植物表达载体PDL28-35-GmPTF19-RFP和PDL28-35-GmPTF19-DNA-UbqDsRed的发根农杆菌，为接下来的PTF19亚细胞定位实验和染色质免疫共沉淀实验奠定基础。
目 录
1.引言 4
1.1我国大豆需求现状： 4
1.2逆境胁迫： 4
1.3盐胁迫影响机制： 4
1.4国内外研究现状 5
1.5 ERF转录因子： 5
2.实验设计： 7
2.1实验准备： 7
2.2实验方法： 7
2.3实验过程： 7
2.3.1提取RNA 7
2.3.2逆转录cDNA 8
2.3.3.克隆目的基因CDS序列 8
2.3.4连T载与转化： 9
2.3.5 T4连接 10
2.3.6 K599转化： 11
4.实验分析： 13
4.1 mRNA电泳图： 13
4.2 目的基因PTF19 cDNA电泳图： 13
4.3 T4连接菌液PCR电泳图： 14
4.4 T4连接酶切电泳图： 14
4.5 K599菌液PCR电泳图： 15
4.6 K599酶切电泳图： 15
5.总结与展望： 15
6.参考文献 17
7.致谢 18 |
