目  录

1引言 4

1.1模式植物拟南芥 4

1.2类钙调蛋白（CMLs） 4

1.3 类钙调蛋白（CMLs）的生理功能 4

1.3.1CMLs与植物生长发育有关 4

1.3.2CML与非生物胁迫响应有关 5

1.3.3CML与生物胁迫响有密切相关 5

1.4 RNA干扰（RNA Interference,RNAi） 5

1.5研究现状及意义 6

2材料与方法 6

2.1主要材料 6

2.2主要仪器 6

2.3实验方法 6

2.3.1突变体验证 6

2.3.1.1植物基因组DNA的提取 6

2.3.1.2三引物扩增法验证纯合突变体 7

2.3.2基因表达检测 7

2.3.2.1植物RNA的提取 7

2.3.2.2逆转录获取cDNA 8

2.3.2.3荧光定量PCR 8

2.3.3 RNAi干扰表达载体构建 9

2.3.3.1 载体连接 9

2.3.3.2 DH5α感受态细胞转化方法 9

2.3.3.3质粒提取方法 10

2.3.3.4酶切体系 10

2.3.3.5电泳目的基因凝胶回收方法 10

3实验结果分析 11

3.1拟南芥cml 49突变体的鉴定 11

3.2 qRT-PCR CML49基因在突变体中的表达 11

3.3 CML49 RNAi干扰表达载体构建 12

4讨论 12

致 谢 14

参考文献 15

 

 

摘 要

Ca2+是生物体中的第二信使，在各种生物体之中起着重要作用。尤其在植物生长发育的整个生活史及植物对外界生物和非生物胁迫响应的过程中起着极其重要的作用。CMLs是一类植物特有的Ca2+感受器，目前已经发现多种植物中含有CMLs基因，这是一类与钙调蛋白同源性很高的类钙调蛋白，参与植物的各种生理生化过程，包括生长发育、生物胁迫、非生物胁迫和病原菌的防卫反应等。CML49是我们前期找到的一个与WRKY53互作的蛋白，其可能通过与WRKY53互作来调控拟南芥衰老相关生理活动。利用三引物法鉴定cml49纯合突变体植株，再通过半定量RT-PCR检测基因在突变体中的表达情况。进一步构建了CML49 RNAi干扰表达载体，为进一步分析研究该基因的功能和调控机制提供实验材料。

关键词：Ca2+；类钙调蛋白(CMLs)；T-DNA插入；荧光定量PCR；