摘    要

钙调素广泛存在于真核细胞内，是一类最重要的、高度保守的钙离子受体，参与各种生理活动的信号转导。钙调素自身没有酶活性，而是通过其靶标—钙调素结合蛋白来调节细胞生理。拟南芥是第一个全基因组被完整测序的模式植物，其有34个VQ模序蛋白，其中VQ22(JAV1)是已知的具有钙调素结合特性的蛋白，并广泛参与植株对非生物逆境胁迫和非生物逆境胁迫的响应调控。VQ27蛋白是一个与VQ22蛋白序列相似度最高的蛋白。本研究主要以拟南芥的VQ27蛋白为主，验证其是否为钙调素结合蛋白。通过构建Pet30a（+）-VQ27原核表达载体，分析VQ27蛋白的诱导表达水平，最后进行VQ27蛋白钙调素体外结合验证。本研究的结果是VQ27蛋白不能和钙调素进行体外结合。鉴定VQ27的钙调素结合特征，有助于探索钙调素结合蛋白的相关功能，并为解析VQ27蛋白的功能提供切入点。

    关键词：钙调素结合蛋白；拟南芥；VQ27蛋白；诱导表达

目    录

引言 5

1材料与方法 7

1.1材料 7

1.2主要试剂和仪器 7

1.3实验方法 7

1.3.1植物基因组RNA的提取 7

1.3.2逆转录cDNA，设计引物扩增基因 7

1.3.3构建载体，转化至感受态细胞 9

1.3.4酶切验证阳性克隆质粒 10

1.3.5蛋白原核表达 11

1.3.6钙调素与VQ27体外结合实验 13

2实验结果和分析 13

2.1Pet30a-VQ27载体构建 13

2.2原核蛋白表达 14

2.3钙调素与VQ27体外结合 14

3讨论 15

参考文献 17

致谢 18