目  录

引言 4

1.材料与方法 6

1.1材料 6

1.1.1主要药品与试剂 6

1.1.2实验主要仪器 7

1.2方法 7

1.2.1 MD-2基因表达与载体构建 7

1.2.2 MD-2蛋白的表达与相关鉴定 7

1.2.3 MD-2蛋白的纯化 8

1.2.4 MD-2蛋白稳定性测试 9

1.2.5 MD-2蛋白浓度测定 9

1.2.6 MD-2蛋白WB检测 9

2.结果 9

2.1 MD-2基因表达与载体构建 9

2.2 MD-2蛋白表达与鉴定 10

2.2.1 SDS-PAGE分析鉴定诱导表达结果 10

2.2.2上清中亲和层析纯化MD-2蛋白 11

2.2.3包涵体通过亲和层析纯化MD-2蛋白 11

2.2.4 MD-2蛋白稳定性测试 12

2.2.5 MD-2蛋白浓度测定 12

2.2.6 MD-2蛋白WB检测 12

3.讨论 13

 

 

 

MD-2蛋白作为潜在药物靶点的表达及鉴定

 

摘要：MD-2是一种能够促进TLR4转导LPS信号的重要分子，该分子能够与TLR4胞外区结合，促进TLR4和LPS结合，在天然免疫识别过程中起重要的调控作用。本研究以MD-2蛋白氨基酸序列为依据合成MD-2基因，通过限制性核酸内切酶在两个酶切切位点NdeI和HindIII进行切割，将MD-2基因插入到大肠杆菌表达载体pET30a中，通过酶切法和测序我们能够确认表达载体的最终准确性，最终分别转到BL21(DE3) 表达菌株以及Top10克隆菌株中大量表达，再通过IPTG对MD-2蛋白进行诱导表达，之后通过亲和层析（Ni-IDA树脂）纯化MD-2蛋白。得到MD-2蛋白浓度为0.183mg/ml，纯度＞90%。结果表明：本研究所采用的蛋白表达方法经济、高效，为进一步研究MD-2的结构及其作用的分子机制提供了基础。

 

关键词：髓样分化蛋白-2；蛋白表达；纯化