摘要

盐胁迫作为主要的非生物胁迫，影响地球上的大多数植物的生长和发育，近些年随着人类社会的不断发展，土壤盐渍化严重影响了农业生产和粮食产量。钙是所有细胞生长发育的必需矿物质元素，同时也作为重要的第二信使在信号传导中起到重要作用。而在外界的刺激下，钙信号通过层层传递与解码调节相关基因表达。钙信号是植物受到外界刺激使得钙离子通过细胞膜上的钙离子通道，从细胞内外的储存空间释放到细胞质中，导致细胞质基质中钙离子浓度的升高。此实验，通过使用能在在拟南芥里稳定表达的对钙离子敏感的水母荧光蛋白，在盐胁迫条件下，对拟南芥感受器的作用机制进行研究。通过筛选出拟南芥中在盐胁迫条件下产生的T-DNA插入突变体基因（缺失早期钙信号），试图找到拟南芥细胞中盐的感受器或被盐特异性诱导的钙离子通道，来阐述拟南芥钙信号感受盐胁迫的分子机制。结果表明：

我们利用实验室筛到的早期钙信号缺失的盐敏感突变体的基因，构建了35S：sim6-GFP载体侵染植物，并且筛选到纯合阳性苗，通过荧光显微镜对35S：sim6-GFP转基因植物的观察，分析sim6很可能主要分布在细胞的质膜上。

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引言 4

1试验设计 6

1.1试验材料与设备 6

1.1.1材料与试剂 6

1.1.2仪器设备 6

1.2试验方法 6

1.2.1 拟南芥总RNA提取 6

1.2.2  反转cDNA 7

1.2.3 KOD高保真酶扩增片段 7

1.2.4凝胶电泳片段的回收 8

1.2.5提取质粒 9

1.2.6双酶切法构建表达载体 9

1.2.7农杆菌转化 10

1.2.8侵染植物 10

1.2.9 烟草瞬时表达 11

2 结果与分析 11

2.1 PCR扩增 11

2.2提质粒电泳检测 11

2.3回收酶切片段电泳估算浓度 12

2.4质粒酶切验证 12

2.5 烟草瞬时表达结果 13

3 结论 13

参考文献 14

致谢 16