摘    要

 

干旱是影响植物生长发育的重要因素之一。提高作物的抗旱性是一个亟待解决的重要问题，由此植物的干旱感受器是一大研究热点。目前已有钙离子感受器OSCA基因家族被证实为与植物干旱感受有关，且该基因家族在拟南芥、水稻、大豆中皆有存在。番茄是我国广泛种植的经济作物，干旱是使番茄减产的一个重要因素，了解番茄细胞内响应干旱胁迫的信号通路以及获得抗旱番茄材料显得尤为重要。本文将以番茄中OSCA家族中与AtOSCA1同源性最高的LeOSCA1.1及LeOSCA1.2基因为研究对象，克隆这两个目的基因，并且做初步的生物信息学分析并构建入门载体，为后续基因的功能研究奠定基础。

 

 

关键词：番茄；干旱感受器；OSCA基因家族;基因克隆

目录

摘    要 2

Abstract 2

1. 引言 2

1.1 干旱胁迫对植物的影响 2

1.2 Ca2+是细胞内作用广泛的重要调节因子 2

1.3 干旱感受器OSCA家族 3

1.4 本实验研究意义及目的 4

2. 材料与方法 4

2.1 材料及材料处理 4

2.2 主要试剂和仪器 4

2.2.1试剂 4

2.2.2主要仪器 5

2.3 生物信息学分析 5

2.4 LeOSCA1基因的克隆 5

2.4.1扩增纯化LeOSCA1基因片段 5

2.4.1.1 番茄叶片Total RNA的提取 5

2.4.1.2 反转录获取cDNA 6

2.4.1.3 以cDNA为模板进行PCR扩增 7

2.4.1.5 PCR产物与载体的连接反应 8

2.4.1.6 连接产物转化感受态细胞 9

2.4.1.7 菌落PCR鉴定 9

2.4.1.8 摇菌以及菌种保存 9

2.4.1.9大肠杆菌内质粒的提取 9

3. 实验结果 11

3.1 相关基因的克隆 11

3.1.1 番茄LeOSCA1基因特异性PCR扩增 11

3.1.2 目的片段回收及入门载体回收 11

3.1.3克隆载体菌落PCR验证 12

3.2 基因初步生物信息学分析 13

3.3 番茄LeOSCA1基因植物入门载体构建 14

4. 讨论与总结 14

参考文献 15

致谢 16