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摘 要
白纹伊蚊（Aedes albopictus）属于幼虫期的整个阶段都生活在水中的双翅目昆虫，对重金属具有富集作用。热激蛋白70作为热激蛋白家族中最重要、最保守的一族，能在细胞应激后，作出很明显的反应，重金属也可以诱导其合成，因此具有监测环境的作用。本研究设置不同浓度（0mg/L、0.005mg/L、0.01mg/L、0.1mg/L）的重金属镉处理白纹伊蚊幼虫，提取幼虫RNA，反转录为cDNA，再运用荧光定量PCR研究不同浓度重金属镉胁迫对白纹伊蚊幼虫hsp70 基因表达的影响。研究结果表明，热激蛋白基因hsp70 的表达水平与处理浓度及处理龄期密切相关，低龄时表达水平随处理浓度增加而增强，四龄时虽高于对照组，但却随浓度增加而降低。0.005mg/L浓度处理会显著增加hsp70的相对表达量，而0.01mg/L和0.1mg/L浓度处理会降低hsp70的相对表达量，但差异不显著。本研究证明热激蛋白70具有环境早期预警作用，为其可以作为监测环境中重金属污染的标志物提供理论依据。
目 录
1 引言........................................................................4
2 材料与仪器.................................................................5
2.1实验仪器和设备...........................................................5
2.2 实验试剂和溶液...........................................................6
2.2.1实验操作所需试剂......................................................6
2.2.2实验操作所需溶液......................................................6
3 实验方法............................................................... ....6
3.1白纹伊蚊饲养 6
3.1.1供试虫源 6
3.1.2人工气候室环境条件 6
3.1.3幼虫饲养方法 7
3.1.4成虫饲养方法 7
3.1.5白纹伊蚊卵的收集 7
3.2白纹伊蚊幼虫的Cd2+处理 7
3.2.1Cd2+浓度的确定 7
3.2.2对各龄幼虫进行Cd2+胁迫处理及取样 7
3.3 Cd2+ 胁迫对白纹伊蚊幼虫hsp70表达的影响 8
3.3.1引物的设计与合成 8
3.3.2RNA的提取 8
3.3.3RNA的检测 8
3.3.4cDNA的合成 9
3.3.5荧光定量PCR 9
4 分析不同浓度Cd2+ 胁迫对白纹伊蚊幼虫hsp70表达的影响.........................10
4.1数据分析 10
4.2实验结果 10
4.2.1RNA检测 10
4.2.2白纹伊蚊幼虫hsp70基因熔解曲线分析 11
4.2.3重金属镉对白纹伊蚊幼虫hsp70表达的影响 12
5 讨论......................................................................13
参考文献.....................................................................14
致谢..................... ...................................................16
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