摘  要

基因敲除动物的构建和应用，为基因功能的研究和探寻新的人类疾病治疗和干预措施提供了理论和技术支持。CAGCre小鼠与Floxed（LoxP）鼠杂交，筛选后代小鼠获得目的基因敲除的小鼠。利用这种方法可以在小鼠特定组织和特定发育时间通过CAG基因的表达控制Cre基因的表达，从而调控Cre-LoxP系统对靶基因的切除、转入、重组。目前已有很多Cre小鼠构建成功的案例，为CAGCre转基因小鼠的建立提供了技术支持和可能性。本实验对转基因操作后的小鼠进行鉴定筛选，根据条带结果得到全身性表达Cre酶的目的CAGCre转基因小鼠，为后续相关实验提供Cre工具鼠，可用于疾病相关基因研究、疾病模型建立、转基因动物培育等试验研究。

目  录

1. 引言 4

1.1. 背景介绍 4

1.1.1. CAG基因简述 4

1.1.2. Cre-LoxP系统概述 4

1.2. 基于Cre-LoxP的基因操作研究进展 5

1.2.1. 建立疾病模型动物 5

1.2.2. 基因功能的鉴定 5

1.2.3. 免疫研究 6

1.2.4. 基于Cre-LoxP的时空控制条件性基因敲除 6

1.3. PCR技术在基因型鉴定方面的应用 6

1.4. 引物设计相关简介 7

1.5. 小鼠作为模式生物的优势 7

1.5.1. 进化上的人源化程度高 7

1.5.2. 小鼠的特性 7

1.5.3. 存在多种实验用近交系小鼠 7

1.5.4. 基因操作技术较成熟 8

2. 实验材料及方法 8

2.1. 实验材料 8

2.1.1. 实验试剂 8

2.1.2. 实验器材 9

2.2. 实验方法 9

2.2.1. 小鼠基本操作技术 9

2.2.2. 样品采集 10

2.2.3. 小鼠DNA提取 10

2.2.4. Thermo ND2000C测量DNA浓度 11

2.2.5. 引物设计 11

2.2.6. 小鼠DNA的PCR扩增 11

2.2.7. 琼脂糖凝胶电泳 12

3. 实验结果分析 13

3.1. 实验结果 13

4. 总结与展望 14

5. 参考文献 14

6. 致谢 15