摘要： 金黄色葡萄球菌是一种人类重要的病原菌，有“嗜肉菌”之称，是典型的革兰氏阳性菌，可以引起严重感染。它是医院感染最危险的病原菌之一，由于其高耐药性及MRSA的检出率逐年上升，使得金黄色葡萄球菌的检测和治疗受到关注和重视。本实验旨在从北冰洋沉积物中分离海洋细菌，并筛选出对金黄色葡萄球菌具有良好抑菌效果的拮抗菌，然后加以鉴定，并研究其抑菌谱。本次实验采用稀释涂布平板法分离细菌菌株，通过划线纯化培养，再通过琼脂扩散法，将抑菌效果最好的菌株进行形态鉴定、镜检、16S DNA鉴定，并研究其对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、弧菌、单增李斯特菌4种细菌的抑制作用。本次实验共分离筛选出24株细菌，最终利用琼脂扩散法筛选出对金黄色葡萄球菌抑菌性最强的拮抗菌，编号为LJY313，其抑菌圈直径为28mm，其对上述大肠杆菌、弧菌有一定的抑制作用，而对单增李斯特菌没有抑制作用。经过生理生化实验，再对16S rDNA进行序列比较，最终确定菌株LJY313为苍白杆菌属（Ochrobactrum）。

关键词：海洋微生物；细菌分离；拮抗菌；生理生化鉴定；16S rDNA鉴定

目录

摘要

Abstract

1  文献综述-1

1.1  海洋微生物研究进展-1

1.1.1  海洋微生物简介-1

1.1.2  海洋微生物的应用价值-1

1.1.3  国内外海洋微生物学研究概况-2

1.2  微生物的分离及纯化-2

1.2.1  微生物分离纯化的原理-2

1.2.2  微生物的分离与纯化方法-3

1.3  金黄色葡萄球菌-4

1.3.1  简介-4

1.3.2  生物学特征-4

1.3.3  致病性-4

1.3.4  耐药性-5

1.4  菌种鉴定方法-5

1.4.1  分子生物学鉴定方法-5

1.4.2  16S rDNA的适用性-6

2  材料与方法-7

2.1  实验材料-7

2.1.1  沉积物来源-7

2.1.2  试剂-7

2.1.3  培养基-8

2.1.4  仪器设备-8

2.1.5  试剂及药品配制-9

2.2  海洋细菌的分离与筛选-9

2.2.1  样品预处理-9

2.2.2  细菌的分离纯化-9

2.2.3  抗菌物质活性的测定方法-10

2.2.4  抑菌谱的测定-10

2.2.5  菌种的保藏-10

2.3  菌种的鉴定-11

2.3.1  形态鉴定-11

2.3.2  生理生化鉴定-11

2.3.3  16s rDNA序列测定及扩增-11

2.3.4  测序-12

3  结果与分析-13

3.1  细菌的分离纯化结果-13

3.2  抗菌物质活性的测定结果-13

3.3  抑菌谱的测定结果-14

3.4  菌种鉴定-15

3.4.1  菌种的形态鉴定结果-15

3.4.2  生理生化鉴定结果-16

3.4.3  DNA测序分析结果-17

3.4.4  菌株系统发育树的构建-18

3.4.5  16S rDNA测序结果-18

结   论-21

参 考 文 献-22

致   谢-24