摘要

为探究大豆转录因子 GmERF ABR1-like 耐盐响应相关功能，本研究对其编码框进行克隆，并构建了 2 个植物表达载体。GmERF ABR1-like 是我们实验前期通过蛋白质组学分析找到的与大豆耐盐响应相关的转录因子。在本次研究中，首先从新鲜的大豆 zhonghuang57 号根部中提取总 RNA，逆转录 cDNA，后通过 PCR 扩增得到目的基因 GmERF ABR1-like，目的基因的大小为 1038bp。构建 pEASY-Blunt Zero T-Vector，将目的基因转入 T 载体后转 Trans1-T1 大肠杆菌进行基因克隆。双酶切验证正确后，构建植物表达载体 pDL28-35Spro-GmERF ABR1-like-RFP 和pDL28-35Spro-GmERF ABR1-like-DHA-UbqDsRed，后转入农杆菌 K599，最后酶切验证两个植物表达载体构建成功。

目 录

目 录

1.引言

1.1. 本研究的目的与意义

1.1.1. 研究意义

1.1.2. 研究目的

2 材料与方法

2.1 材料

2.1.1 实验材料和试剂

2.1.2 菌株和载体

2.1.3 培养基的配置

2.2目的基因的克隆

2.2.1 大豆萌发及种植

2.2.2 大豆根部总 RNA 的提取

2.2.3 RNA逆转录 cDNA

2.2.4 目的基因的扩增

2.2.5 cDNA 凝胶回收

2.2.6 将目的基因 cDNA 连到 T 载体上

2.2.7 转化

2.2.8 质粒的提取

2.3 pDL28-35Spro-GmERF ABR1-like-ERF和pDL28-35S pro-GmERF ABR1-like-DHA-UbqDsRed 植物表达载体的构建

2.3.1 质粒酶切验证

2.3.2 T4 连接

2.3.3 T4 载体转入大肠杆菌

2.3.4 质粒提取

2.3.5 农杆菌 K599介导的转化

3.实验结果分析

4.讨论与展望