摘    要

 

天目铁木（Ostrya rehderiana Chun）是桦木科铁木属植物，为浙江天目山特有树种。当地现存野生成年植株5株，但其中仅有1个稳定结种，其余四株育性极低，濒临灭绝。在我们前期的实验中，对不同育性野生个体的雌花序进行了转录组表达差异分析，发现了一个与育性负相关的基因OrGEX，表明这个基因很可能参与影响了该物种育性，但其具体功能未见报道。本研究拟分析和克隆这个天目铁木OrGEX基因，构建植物表达载体并导入农杆菌，以期进一步遗传转化模式植物，获取转基因植株，探究该基因如何影响植株育性，探索其潜在功能，为天目铁木的致濒机制提供理论依据。

 

关键词：天目铁木；育性；OrGEX基因；克隆；致濒机制

目   录

1. 引言 1

1.1 天目铁木现状 1

1.2 研究意义 1

1.3 研究相关背景 1

1.4 研究主要内容及拟解决问题 2

2. 材料与方法 3

2.1 材料与试剂 3

2.1.1  材料 3

2.1.2  试剂 3

2.1.3  主要仪器 3

2.2 实验方法 3

2.2.1  基因克隆 3

2.2.2  过表达载体的构建 9

2.2.3  表达以及干涉载体转化农杆菌 10

3. 实验结果及分析 11

3.1 天目铁木育性相关基因OrGEX的克隆 11

3.1.1 天目铁木OrGEX基因特异性RT-PCR扩增 11

3.1.2 克隆载体菌落PCR验证 11

3.1.3克隆载体酶切验证 12

3.2 天目铁木OrGEX基因植物表达载体构建 13

3.2.1 表达载体菌落PCR-验证 13

3.2.2 表达载体酶切验证 13

3.2.3 农杆菌菌落PCR验证 14

4. 讨论与总结 14

4.1 讨论 14

4.2 总结 15

参考文献 16

致谢 17