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摘 要
温山药是浙江省特有的药食两用植物。本次研究以温山药植株为材料，利用发根农杆菌K599侵染温山药无菌苗的叶片，诱导出转基因毛状根；分别提取毛状根和普通根基因组DNA，利用发根农杆菌K599 Ri质粒pRi2659 T-DNA上rolB序列和gfp基因序列设计引物，进行目的基因片段的扩增，结果显示：毛状根系利用rolB基因引物扩增出与菌液扩增条带大小一致约700 bp条带，利用gfp基因引物扩增出与菌液扩增条带大小一致约500 bp条带；而普通根没有扩增出任何条带。利用Zeiss荧光显微镜对毛状根和普通根荧光检测，结果显示毛状根发出绿色荧光，而普通根未见荧光。本次研究显示可利用发根农杆菌获得转基因毛状根，并且研究结果为利用毛状根工厂化生产温山药的药用成分和作为反应器生产重组蛋白提供了技术支撑。
目录
1. 引言 6
2. 材料与方法 6
2.1. 实验材料 7
2.2. 实验方法 7
2.2.1. 发根农杆菌K599的活化与培养 7
2.2.2. 毛状根的诱导和繁殖 7
2.2.3. 毛状根的分子鉴定和荧光显微镜观察 9
3. 结果分析 11
3.1. 毛状根的诱导繁殖结果 11
3.1.1. 毛状根的诱导结果 11
3.2. 毛状根的分子鉴定结果 12
3.2.1. rolB序列PCR扩增结果 12
3.2.2. gfp序列PCR扩增结果分析 12
3.2.3. 毛状根荧光检测结果分析 13
4. 讨论 13
参考文献 15
致谢 16 |
