摘    要

针对现有技术存在的问题，我们拟设计提供一种基于植物病毒载体的高效、快速诱导单子叶植物开花的技术方案，通过该方法可将原本需要3~4个月开花的单子叶植物开花、抽穗时间缩短至9周内。参考数据库中拟南芥FT基因组全序列设计合成一对特异引物克隆合成AtFT基因，并用相同限制性内切酶双酶切AtFT与FoMV，连接酶连接目的基因与病毒载体，随后转化DH5α大肠杆菌感受态，Km抗性平板筛选阳性克隆，采用直接在植株叶片上用石英砂摩擦造成伤口，将纯化载体溶液涂于糜子幼嫩叶片的方法转化。凝胶电泳及序列分析结果显示，AtFT与FoMV连接构建重组病毒载体成功，纯化载体溶液侵染糜子叶片5周后开花，与未转化AtFT植株对照相比开花时间显著提前，表明以狗尾草花叶病毒（Foxtail mosaic virus, FoMV）作为植物基因工程病毒载体方案，与目前广泛使用的以CaMV和TAV为病毒载体具有同等可使目的基因正确表达效应，为拟南芥中其它功能基因的鉴定实验奠定了基础。 

目    录

引言 4

1.材料与方法 4

1.1材料与试剂 4

1.1.1植物材料、菌种和病毒 4

1.1.2酶与化学试剂 5

1.2研究方法 5

1.2.1 拟南芥RNA的提取 5

1.2.2 AtFT基因片段的克隆 5

1.2.3 FoMV抽提质粒DNA 5

1.2.4 PCR产物与质粒载体双酶切 5

1.2.5电泳检测及回收纯化 6

1.2.6 FoMV-AtFT病毒载体构建 6

1.2.7 大肠杆菌DH5α转化及Kan筛选阳性克隆 6

1.2.8 重组质粒DNA的检测 6

1.2.9 转化糜子植株 7

2.结果与分析 7

2.1 拟南芥AtFT基因的克隆及表达载体的构建 7

2.2 重组质粒转化大肠杆菌DH5α及Kan阳性克隆筛选 8

3.结论与讨论 10

3.1 FoMV质粒载体的可行性分析 10

3.2 利用拟南芥AtFT基因改造糜子植株的生产 11

3.3 发展病毒载体的重要性 12

参考文献 13

致谢 14