摘要：【目的】针对市售水产养殖复合微生物制剂中的菌种群进行菌种鉴定。【方法】根据不同的菌群，优化选择培养基配方，通过菌种培养、提取DNA、电泳、PCR扩增及测序实验，得到菌种的序列，通过比对确定菌种类型，完成菌种鉴定。【结果】通过基因组提取、PCR扩增及测序，得到的片段中，酵母菌的在600bp左右，其他三种菌约为1300bp。进一步通过对序列进行比对，搜查其亲源关系得知，对芽孢杆菌、乳酸菌、酵母菌的菌种推测准确；放线菌A是芽孢杆菌属，B可能是不动杆菌属，即为革兰阴性杆菌，只有C是放线菌。【结论】本研究为微生物制剂菌种鉴定提供了比较精确的鉴定方式，可以准确地鉴定菌种的类别，同时也确定它和其他菌种之间的序列有着不同程度的差异。菌种的相似度大小丰富了微生物种类。本试验为今后微生物制剂菌种鉴定提供了实验证明和理论依据。

关键词：菌种；鉴定；PCR；16S rDNA；26S rDNA；进化树

目录

摘要

Abstract

1 文献综述-1

1.1 前言-1

1.2 水产养殖-1

1.2.1 研究现状-1

1.2.2 发展前景-2

1.2.3 意义-2

1.3 微生物菌种的培养-2

1.4 菌种简介-3

1.4.1 芽孢杆菌-3

1.4.2 放线菌-3

1.4.3 乳酸菌-4

1.4.4 酵母菌-4

1.5  菌种鉴定方法-4

1.6 菌种分类鉴定技术-5

1.6.1 菌种分类技术-5

1.6.2 DNA的G+C含量测定-5

1.7 16S rDNA序列-6

1.8 系统发育树-6

2 材料与方法-7

2.1 实验材料-7

2.1.1 菌种来源-7

2.1.2 仪器设备-7

2.1.3 药品-8

2.1.4 培养基-8

2.2 实验方法-9

2.2.1 基因组提取-9

2.2.2 PCR扩增-10

2.2.3 电泳PCR产物-11

2.2.4 测序-11

2.2.5 基菌株的序列比对-11

3 实验结果与分析-13

3.1 菌种选择-13

3.1.1 芽孢杆菌菌落形态-13

3.1.2 放线菌菌落形态-14

3.1.3 乳酸菌菌落形态-14

3.1.4 酵母菌菌落形态-15

3.2 基因组电泳结果-16

3.2.1 芽孢杆菌-16

3.2.2 放线菌-16

3.2.3 乳酸菌-17

3.2.4 酵母菌-18

3.3 PCR产物电泳结果-19

3.3.1 芽孢杆菌16S rDNA的PCR产物-19

3.3.2 放线菌16S rDNA PCR产物-20

3.3.3 乳酸菌16S rDNA PCR产物-21

3.3.4 酵母菌26S rDNA PCR产物-22

3.4 序列比对结果-22

3.4.1 芽孢杆菌-23

3.4.2 放线菌-24

3.4.3 乳酸菌-24

3.4.4 酵母菌-25

3.5 进化树-25

3.5.1 芽孢杆菌-26

3.5.2 乳酸菌-27

3.5.3 酵母菌-28

结论-29

参 考 文 献-30

致谢-31