摘要

植物的开花受到精确且错综复杂的网络调控，多种内源和外源信号能调控植物开花。温度和光照是主要的环境信号,通过融合转录调控的影响花期开花轨迹。而内源信号主要是将各自产生的抑制或促进开花的效应作用于SOC1、FT、LFY 这些关键基因,其效应之和最终决定高等植物是否开花。

本次研究的研究对象是cs89835，对其进行种植培养，从叶片中获得其DNA，通过PCR扩增技术得到一定量的基因片段，再进行基因测序，然后与拟南芥基因进行比较，找出突变位点，cs89835为点突变。设计相应引物进行酶切验证，从而筛选出纯合突变体，再进行表型观察。对已筛选出的纯合突变体和野生型进行种植培养，观察他们的莲座叶数量，并依此判断早晚花。根据表型，通过定量PCR检测5个已知的开花途径中关键基因，从而判断该基因如何调节开花。研究结果显示，FT显著下降，FLC显著升高，所以表型该为晚花，但是实际结果却是早花。结合开花时间来看，该基因的缺失使得拟南芥生长延缓，具体调节机制还有待进一步探究。

目录

引言 5

1 实验材料 7

1.1 植物材料 7

1.2 分子生物学试剂 7

1.3 实验仪器 7

2 突变体鉴定 7

2.3.1 LB培养基的配置 7

2.3.2 种子灭菌 7

2.3.3 拟南芥的种植 7

2.3.4 拟南芥基因组DNA的提取 8

2.3.5 PCR扩增 8

2.3.6 电泳检测 9

图 1 PCR产物 10

2.3.7 提取gDNA 10

2.3.8 PCR扩增 11

PCR扩增程序： 11

2.3.9 凝胶电泳检测 11

图2 PCR产物 12

2.3.10 单酶切验证 12

图 3 酶切 13

3 表型分析 13

3.1 种子破休眠 13

3.2 拟南芥的种植 13

3.3 拟南芥莲座叶数量及开花时间的统计方法 13

3.4 开花表型 14

图6 15

3.5 定量PCR 15

3.5.1 拟南芥总RNA的提取 15

3.5.2 RNA反转录cDNA 16

3.5.3 PCR扩增 16

图7 17

第二批长光照： 18

图8 18

4 实验结果与分析 18

4.1 纯合突变体的筛选 18

4.2 突变体cs89835的表型确定 18

5 全文小结与展望 19

参考文献 21

致谢 23