摘    要

药食两用植物既属于中药范畴，有良好的治病疗效，又是大家经常吃的富有营养的有保健功能的可口食品。以苦蘵为代表的药食两用植物受到市场的追捧，这也要求我们需要对酸浆属植物开展相关研究。在本实验中我们应用潜病毒狗尾草花叶病毒（FoMV）实现增强绿色荧光蛋白（eGFP）基因的的过表达，通过病毒在受体植株苦蘵内大量复制的同时表达eGFP。同时应用烟草脆裂病毒（TRV）病毒，达到诱导的基因沉默的目的。病毒诱导的基因沉默（VIGS）通过将含有八氢番茄红素脱氢酶基因（PDS）基因的重组病毒载体导入到苦蘵中，抑制受体植物内源基因的表达，使其表现出目标基因功能丧失或表达水平下降的表型。本实验可以为药食两用植物的进一步开发利用提供理论依据和研究指导。

目    录

 

引言： 5

1.1. 实验材料 7

1.1.1. 种子与质粒 7

1.1.2. 受体植物 7

1.2. 实验方法 7

1.2.1. 苦蘵种子萌发优化 7

1.2.2. 结果统计 7

1.3. FoMV-eGFP 载体构建 8

1.3.1. 载体的选择 8

1.3.2. 引物序列信息 8

1.3.3. 目的片段eGFP进行pcr扩增 8

1.3.4. 琼脂糖凝胶电泳 9

1.3.5. 对扩增后的eGFP片段进行回收 10

1.3.6. 对扩增后的eGFP片段进行酶切 10

1.3.7. 对FoMV载体进行酶切 11

1.3.8. 回收的PCR产物与载体连接 11

1.3.9. 连接产物转化 11

1.3.10. 摇菌 12

1.3.11. 菌落PCR 12

1.3.12. 摇菌 13

1.3.13. 提取质粒 13

1.3.14. 质粒PCR 14

1.3.15. 将重组质粒转入农杆菌 15

1.3.16. 农杆菌侵染植物 15

1.3.17. 观察结果 16

1.4. TRV沉默载体构建 17

1.4.1. 载体的选择 17

1.4.2. 目的片段PDS进行PCR扩增 18

1.4.3. 琼脂糖凝胶电泳 18

1.4.4. 对扩增后的PDS片段进行酶切 19

1.4.5. 对TRV载体进行酶切 19

1.4.6. 回收的PCR产物与载体连接 19

1.4.7. 连接产物转化 20

1.4.8. 摇菌 20

1.4.9. 菌落PCR 20

1.4.10. 摇菌 20

1.4.11. 提取质粒 20

1.4.12. 质粒PCR 21

1.4.13. 将重组质粒转入农杆菌 21

1.4.14. 农杆菌侵染植物 21

1.4.15. 观察结果 21

1.4.16. 采样 22

1.4.17. 苦蘵基因组的提取 22

1.4.18. 反转录得cDNA 23

1.4.19. 定量 PCR技术 24

讨论 26

参考文献 27

致谢 28