摘    要

    

 

本文主要对乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞的核内Sm复合体中的成熟miRNA展开了研究。利用SmD1特异性抗体免疫共沉淀得到Sm剪接复合体，之后将其内的小RNA进行测序，发现正常乳腺上皮细胞和乳腺癌细胞中分别有123条和170条成熟miRNA存在差异。采用Northern印迹分析和凝胶阻滞迁移率实验，证明这些miRNA确实存在差异，且能与Sm剪接复合体相互作用。试验结果显示，在这些存在差异的miRNA中，有94条在乳腺癌细胞核内Sm复合体中的表达显著上调，39条显著下调。这些结果表明，乳腺癌细胞和正常乳腺上皮细胞的核内Sm复合体中成熟miRNA存在差异，这些miRNA可能通过调控Sm剪接复合体，从而调控前体mRNA的可变剪接，参与乳腺癌发生的调控。

目    录

 

封面……………………………………………………………………………………1

摘要……………………………………………………………………………………2

关键词…………………………………………………………………………………2

1 引言…………………………………………………………………………………4-5

2 材料与方法…………………………………………………………………………5-7

2.1 细胞培养………………………………………………………………………5

2.2细胞核的分离…………………………………………………………………5

2.3 蛋白质印迹（western blot）分析……………………………………………6

2.4 Sm复合体的免疫共沉淀（CoIP）……………………………………………6

2.5 Sm复合体中microRNA的实时定量PCR检测………………………………6

2.6 小RNA测序及序列分析………………………………………………………6

2.7 Northern印迹（Northern blot）…………………………………………………6-7

2.8 电泳迁移率试验（EMSA）………………………………………………………7

3 结果与分析……………………………………………………………………………7-13

3.1 核内Sm复合体中成熟miRNA的发现…………………………………………7-8

3.2 核内Sm复合体中miRNA的分析………………………………………………8-10

3.3 miRNA与Sm复合体间的相互作用……………………………………………11

3.4 Sm复合体中与乳腺癌发生相关的miRNA………………………………………11-13

4 讨论……………………………………………………………………………………13-15

5 结论……………………………………………………………………………………15

参考文献…………………………………………………………………………………15-19

致谢………………………………………………………………………………………19