摘要：

植物在与病毒的长期共同进化过程中，其形成了使病毒在转录后发生基因沉默的RNA介导的DNA甲基化（RdDM）修饰机制去抵御病毒的侵染。RdDM是一种RNA介导的表观遗传修饰过程，其开始于RNA沉默或RNA干扰（RNAi）途径所产生的siRNAs以及相关的酶。本研究主要通过在下调本氏烟中的RdDM途径中6个重要的酶组分以及4种DCL蛋白后，结合分子生物学分析及实时荧光定量PCR（qRT-PCR）的方法对RdDM 酶的表达量进行检测，然后联系ACMV病毒复制量的变化，明确RdDM途径抑制病毒DNA的过程和对RNA沉默传递的影响, 本实验表明DRM2基因的超表达的转基因株系中，ACMV的积累量明显降低，低于野生型植物，提示DRM2基因的超表达会对病毒的复制起到抑制的作用。后期需要进一步的研究实验来拓展现有的RdDM分子机制理论。 

 

关键词： 本氏烟； 双生病毒； RdDM； RdDM酶； 定量PCR

目录

一、 前言 4

二、 引言 6

三、 RdDM途径相关酶在病毒侵染过程中表达量变化的定量检测 8

1.植物材料和生长条件 8

2.分子生物学试剂 8

3.ACMV侵染性克隆的制备 8

4.ACMV侵染性克隆摩擦接种转基因烟草 9

5.接种样品的观察记录，分析植物的病症和表型，定期取样 9

6.ACMV 在植物中积累量的检测及定量分析 9

7.荧光定量PCR 12

四、 实验结果与分析 15

8.接种病毒后的植物表型记录 15

9.样品接种ACMV后第7天，10天，14天，21天的发病率及回复率统计 19

10.实时荧光定量PCR结果 22

五、 讨论 29

六、 全文小结 30

七、 致谢 31

八、 参考文献 32